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本试剂盒无需处理样本，利用无机磷与钼酸铵结合生成磷钼酸铵，通过酶标仪直接检测325～340nm处吸光度，根据公式计算出无机磷含量。紫外法优点在于操作简单、快速、稳定；缺点在于易受溶血、黄疸、脂血的干扰。

血清中的无机磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-两种磷酸根阴离子组成，上述阴离子在在不同的pH环境下能快速相互转换，在pH7.4血清中两种磷酸根阴离子浓度比例为1:4；在酸中毒环境下二者浓度约为1:1；在碱中毒环境下二者浓度比例为1:9；在pH4.5尿液中浓度比例为100:1。WHO推荐的常规检测方法为比色法，我国卫生部临检中心推荐的常规方法为硫酸亚铁钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法，亦可采用紫外分光光度法。

• 本法应在5min～2h内检测，3h后标准管吸光度无变化，测定管吸光度随着时间的延长而上升。
  
• 溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。
  
• 黄疸和脂血样本应做标本空白。
  
• 本法能够用于自动生化分析仪终点检测法。
  
• 钼酸铵显色液配制后可4℃保存2周，如溶液变浑浊或颜色加深则应弃用。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数
  
• 340nm测得的吸光度是325nm的82%。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

• 制备样品(选做)：
  
  • 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于Pi的检测。
    
  • 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Pi的检测。
    
  • 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Pi，可以使用ddH2O稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。
    
  • 选做：样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的Pi含量。
• 制备磷标准工作液：取适量的磷标准(1mg/mL)，按磷标准(1mg/mL)∶磷标准稀释液=1∶39的比例稀释，即获得磷标准工作液(25μg/mL=0.807mmol/L)，4℃保存，用于Pi的检测。
  
• 制备钼酸铵显色液：称取适量的钼酸铵粉末，按照钼酸铵粉末∶2×钼酸铵稀释液∶去离子水=12mg∶10mL∶10mL的比例混合溶解，即可使用。亦可称取120mg钼酸铵粉末加入100mL去离子水，充分溶解后分装成10mL或适当规格的小份，使用时与2×钼酸铵稀释液等比例混合即可使用，-20℃保存，可适当延长保质期。钼酸铵显色液配制后可4℃保存2周，如溶液变浑浊或颜色加深则应弃用。请注意，本制品提供多于实际用量的钼酸铵粉末。
  
• Pi加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。如果样品中的无机磷浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。
  

  加入物(μL)	空白管	标准管	测定管
  ddH2O	5	—	—
  磷标准工作液((25μg/mL)	—	5	—
  待测样品	—	—	5
  钼酸铵显色液	200	200	200

• Pi测定：混匀，室温静置5min，以空白调零，酶标仪340nm处测定，读取标准孔、测定孔的吸光度(即A_标准，A_测定)。

• 血清、血浆中无机磷计算公式：
  磷＝(A_测定/A_标准)×0.807×N(mmol/L)＝(A_测定/A_标准)×25×N(mg/L)
  
• 尿液中无机磷计算公式：
  磷＝(A_测定/A_标准)×0.807×N(mmol/L)＝(A_测定/A_标准)×25×N(mg/L)
  
• 组织中磷计算公式：
  磷(mmol/mg)＝(A _测定/A _标准)×0.807×N/c